ĐỊNH DANH CÁC CHỦNG Phytophthora VÀ Phytopythium PHÂN LẬP TRÊN MẪU BỆNH VÀ MẪU ĐẤT VÙNG RỄ BƯỞI NĂM ROI TẠI XÃ MỸ HÒA, THỊ XÃ BÌNH MINH, TỈNH VĨNH LONG

Abstract

The study was aimed to identify Phytophthora and Phytopythium species present in disease samples (leaves and fruits) and from the rhizosphere soil of Nam Roi pomelo in My Hoa commune, Binh Minh town, Vinh Long province. Based on morphological characteristics on V8 medium, 18 out of 73 Phytophthora and Phytopythium isolates were selected to represent subsequent experiments. The experiment evaluating pathogenicity on Nam Roi pomelo leaves was arranged in a completely randomized design with one factor, 4 replications, and 18 treatments, with each treatment being one Phytophthora or Phytopythium isolate. Morphological characteristics and sizes of sporangia, chlamydospores and sporangial proliferation of the 18 representative Phytophthora and Phytopythium isolates were recorded. DNA of the 18 representative Phytophthora and Phytopythium isolates was PCR-amplified using the ITS1/ITS4 primer pair; subsequently, PCR products with a clear, bright band were sequenced; the sequencing products were processed using Finch TV software (version 1.4.0), compared with reference sequences (BLAST) on NCBI for species identification and a phylogenetic tree was constructed using MEGA software (version 11.0.14). The results showed that all 18 representative isolates caused disease on Nam Roi pomelo leaves after 5 days of inoculation with varying degrees of severity, depending on the virulence of each isolate. Based on morphological characteristics and PCR-sequencing results, the 18 representative isolates were divided into 5 Groups: Group 1 included 10 isolates: PP7, PP8, PP9, PP13, PP17, PP18, PP22, PP23, PP27, and PP28, belonging to the species Phytophthora virginiana; group 2 included 5 isolates: PP1, PP2, PP3, PP4, PP5, belonging to the species Phytophthora parvispora; group 3 included 1 isolate, PP21, belonging to the species Phytophthora prodigiosa; group 4 included 1 isolate, PP11, belonging to the species Phytophthora citrophthora; group 5 included 1 isolate, PP12, belonging to the species Phytopythium helicoides.

Tóm tắt

Nghiên cứu được thực hiện nhằm mục tiêu định danh các chủng Phytophthora và Phytopythium hiện diện trong mẫu bệnh (lá và trái) và đất vùng rễ bưởi Năm Roi tại xã Mỹ Hòa, thị xã Bình Minh, tỉnh Vĩnh Long. Dựa vào đặc điểm hình thái trên môi trường V8, 18/73 chủng Phytophthora và Phytopythium được chọn đại diện cho các thí nghiệm tiếp theo. Thí nghiệm đánh giá khả năng gây bệnh trên lá bưởi Năm Roi được bố trí hoàn toàn ngẫu nhiên một nhân tố gồm 4 lặp lại với 18 nghiệm thức, mỗi nghiệm thức là 1 chủng Phytophthora hoặc Phytopythium. Đặc điểm hình thái và kích thước của bọc bào tử, bào tử áo và sự tăng sinh của bọc bào tử của 18 chủng Phytophthora và Phytopythium đại diện được ghi nhận. ADN của 18 chủng Phytophthora và Phytopythium đại diện được PCR với cặp mồi ITS1/ITS4; sau đó các sản phẩm PCR với một băng sáng rõ được giải trình tự; sản phẩm giải trình tự sẽ được xử lý bằng phần mềm Finch TV (phiên bản 1.4.0), so sánh với các trình tự tham khảo (BLAST) trên NCBI để xác định loài và xây dựng cây phả hệ bằng phần mềm MEGA (phiên bản 11.0.14). Kết quả ghi nhận cho thấy, 18 chủng đại diện đều gây bệnh trên lá bưởi Năm Roi sau 5 ngày lây bệnh với các mức độ khác nhau, tùy thuộc vào độc tính của từng chủng. Dựa vào đặc điểm hình thái và kết quả PCR - Gải trình tự,  18 chủng đại diên được chia làm 5 nhóm: Nhóm 1 gồm 10 chủng phân lập: PP7, PP8, PP9, PP13, PP17, PP18, PP22, PP23, PP27 và PP28, thuộc loài Phytophthora virginiana; nhóm 2 gồm 5 chủng phân lập: PP1, PP2, PP3, PP4 và PP5, thuộc loài Phytophthora parvispora; nhóm 3 gồm 1 chủng phân lập: PP21, thuộc loài Phytophthora prodigiosa; nhóm 4 gồm: 1 chủng phân lập: PP11, thuộc loài Phytophthora citrophthora; nhóm 5 gồm 1 chủng PP12 là thuộc loài Phytopythium helicoides.