ẢNH HƯỞNG CỦA NAA, MÔI TRƯỜNG KHOÁNG VÀ NGUỒN CARBOHYDRATE LÊN NUÔI CẤY TẾ BÀO HUYỀN PHÙ CÂY XẠ ĐEN (Ehretia asperula Zoll. & Mor.)

Abstract

Ehretia asperula is a precious medicine that has long been used in traditional medicine, modern studies have shown that E. asperula contains many secondary compounds with important biological activity. Cell suspension culture is an effective method for biomass and secondary compound production. In this study, the role of NAA, mineral medium, and carbohydrate source in the growth of the cell suspension was also studied. The results showed that the young stem tTCL explants induced friable callus in the MS medium supplemented with 2.4 D which suitable as materials for cell suspension culture. This callus was cultured in liquid MS medium supplemented with NAA (0.5 - 2.0 mg/L) under shake condition, after 15 days of cultured the best growth curve was in MS medium supplemented with 1.5 mg/L NAA. Also, different types of mineral medium and sources of carbohydrate are investigated to determine the best condition for the growth of Xa den cell suspension. After 15 days of cultured, the results showed that B5 medium supplemented with 30 g/L sucrose was the best for culturing E. asperula cell suspension. From the above results, the B5 medium supplemented with 1.5 mg/L NAA and 30 g/L sucrose was considered to be the optimal medium for the culture of Xa den (BM) cell suspension. The biomass obtained on BM medium was determined to contain secondary compounds, the content of these compounds changes with culture time. Recorded at the maximum point of the growth curve showed that the phenolic content was 47.74 mg GAE/g DW and the rosmarinic acid (RA) content was 43.61 mg/g DW.

Tóm tắt

Xạ đen (Ehretia asperula) là một vị thuốc quý từ lâu đã được sử dụng trong y học cổ truyền, ngày nay nhiều nghiên cứu cũng đã cho thấy Xạ đen chứa nhiều hợp chất thứ cấp có hoạt tính sinh học quan trọng. Nuôi cấy huyền phù là phương pháp hiệu quả để sản xuất sinh khối và thu nhận các hợp chất thứ cấp. Trong nghiên cứu này, vai trò của NAA, môi trường khoáng và nguồn carbohydrate trong quá trình sinh trưởng của tế bào huyền phù cũng đã được nghiên cứu. Kết quả cho thấy mẫu tTCL thân non cảm ứng tạo mô sẹo xốp bở trong môi trường có bổ sung 2,4 D, thích hợp làm nguyên liệu cho nuôi cấy tế bào huyền phù. Mô sẹo này được nuôi cấy vào môi trường MS lỏng bổ sung NAA (0,5 – 2,0 mg/L) trong điều kiện lỏng lắc, sau 15 ngày nuôi cấy huyền phù tăng sinh tốt nhất trong môi trường MS bổ sung 1,5 mg/L NAA. Bên cạnh đó các loại môi trường cũng như nguồn carbohydrate khác nhau cũng được khảo sát để xác định được loại môi trường tốt nhất cho sự sinh trưởng của tế bào huyền phù Xạ đen. Sau 15 ngày nuôi cấy kết quả cho thấy môi trường B5 bổ sung 30 g/L sucrose là môi trường thích hợp nhất cho việc nuôi cấy tế bào huyền phù cây Xạ đen. Từ các kết quả trên, môi trường B5 bổ sung 1,5 mg/L NAA, 30 g/L sucrose được xem là môi trường tối ưu cho nuôi cấy tế bào huyền phù Xạ đen (BM). Sinh khối tế bào thu nhận trên môi trường BM được xác định có chứa các hợp chất thứ cấp, hàm lượng các chất thứ cấp này cũng thay đổi theo thời gian nuôi cấy. Kết quả ghi nhận tại điểm cực đại của đường cong tăng trưởng cho thấy hàm lượng phenolic đạt 47,74 mg GAE/g DW và hàm lượng rosmarinic acid (RA) đạt 43,61 mg/g DW.