ĐÔNG LẠNH TINH TRÙNG LỢN BẰNG PHƯƠNG PHÁP THỦY TINH HÓA

Abstract

This study aims to develop a procedure of frozen porcine spermatozoa by vitrification and investigate the effect of glycerol concentration on the viability and mobility of porcine spermatozoa during cryopreservation and post-thawing. Porcine sperm from 3 different breeds Landrace, Duroc and Duroc-landrace hybrid (n = 9; r = 3) was prepared by centrifuging at a rate of 600×g for 10 minutes at 18°C to eliminate seminal plasma, after that porcine spermatozoa were diluted in media included lactose and egg-yolk (v.v.), in the different concentration of glycerol (4, 6, 8%) to access the affects of glycerol concentration on sperm quality and vitrified using the cryotube method in nitrogen for 72 hours. The percentage of motile sperm (observed directly under an optical microscope) and the percentage of alive sperm (Eosin - Nigrosin staining) were evaluated in pre-vitrification and post-vitrification samples. Results suggest that preservative concentration of 8% sperm resulted in a higher viability (37.55; 39.44; 37.99%) and motility (34.56; 36.79; 34.83%) rate than the samples at other concentrations: 4% and 6%. In conclusion, vitrification is a simple technique and a potential tool in reproductive management at pig farms but requires careful research, by determining the concentration and type of cryoprotectant as well as other factors related to vitrification and thawing. 

Tóm tắt

Nghiên cứu thực hiện nhằm đông lạnh thủy tinh hóa tinh trùng lợn và sự ảnh hưởng nồng độ chất bảo quản glycerol trong môi trường pha loãng để tinh trùng sau khi đông lạnh ít bị ảnh hưởng đến tỷ lệ sức sống, hoạt lực và có thể phối giống nhân tạo. Tinh trùng của giống lợn Landrace, Duroc và lợn lai Duroc x Landrace (n = 9; r = 3) đã xử lý sẽ pha loãng với môi trường có bổ sung glycerol ở các nồng độ 4, 6 và 8%. Mẫu được đưa vào các ống trữ lạnh (cryotube) 1,5 mL để tiến hành đông lạnh thủy tinh hóa ở -196°C. Sau 72 giờ lưu trữ, tiến hành giải đông ở nhiệt độ phòng trong 15 phút. Chỉ tiêu về tỷ lệ sức sống và hoạt lực sẽ được đánh giá ở các mẫu trước và sau đông lạnh. Kết quả nghiên cứu ghi nhận: sau lưu trữ lạnh, các mẫu khi pha loãng với môi trường ở glycerol 8% có tỷ lệ sức sống (37,55; 39,44; 37,99%) và hoạt lực (34,56; 36,79; 34,83%) cao hơn các mẫu ở nồng độ 4% và 6%. Kết quả nghiên cứu: xây dựng thành công quy trình đông lạnh tinh trùng lợn bằng phương pháp thủy tinh hóa với nồng độ glycerol 8% trong môi trường đông lạnh cho kết quả đông lạnh tinh trùng lợn tốt, có tỷ lệ tinh trùng di động tiến thẳng cao.