TẠO DÒNG VI KHUẨN E. coli MANG GEN RGP MÃ HÓA HORMONE KÍCH THÍCH SINH SẢN HẢI SÂM

Abstract

Relaxin-like Gonad-stimulating Peptide (RGP) hormone is an advanced and effective solution in sea cucumber artificial breeding. In order to produce a large amount of RGP hormone with high biological activity, it is necessary to use recombinant protein technology through E. coli bacteria and P. pastoris yeast. Therefore, in this study, the pPIC9K vector was designed to carry the RGP gene (pPIC9K-RGP). The E. coli JM109 strain was constructed to carry the recombinant pPIC9K-RGP plasmid. After screening with the antibiotic ampicillin, E. coli colonies carrying the recombinant pPIC9K-RGP plasmid were produced. The DNA sequencing results of the pPIC9K-RGP plasmid from E. coli showed that the expression of the RGP gene encoding the sea cucumber reproductive stimulating hormone had been constructed in E. coli. This is an important step towards continuing the expression of the RGP hormone in P. pastoris yeast and the production of recombinant RGP hormone for sea cucumber breeding in Vietnam.

Tóm tắt

Hormone kích thích sinh sản RGP (Relaxin-like Gonad-stimulating Peptide) là một giải pháp tiên tiến, hiệu quả trong sản xuất giống hải sâm. Để sản xuất lượng lớn hormone RGP và có hoạt tính sinh học cao, cần sử dụng công nghệ protein tái tổ hợp thông qua vi khuẩn E. coli và nấm men Pichia pastoris. Vì vậy, trong nghiên cứu này, vector pPIC9K đã được thiết kế để mang gen RGP (pPIC9K-RGP). Chủng E. coli JM109 được cấu trúc để mang plasmid pPIC9K-RGP tái tổ hợp. Quá trình sàng lọc bằng kháng sinh ampicillin sau đó đã giúp thu được dòng khuẩn lạc E. coli mang plasmid pPIC9K-RGP tái tổ hợp. Kết quả giải trình tự ADN của plasmid pPIC9K-RGP từ E. coli sau sàng lọc kháng sinh cho thấy, gen RGP mã hóa hormone kích thích sinh sản hải sâm đã được cấu trúc trong E. coli. Đây là khâu quan trọng tạo nguồn nguyên vật liệu ban đầu  để sản xuất hormone RGP tái tổ hợp trên nấm men P. pastoris và tiến tới sản xuất hormone  này ở quy mô thương mại phục vụ sản xuất giống hải sâm ở Việt Nam.