TẠO CHỦNG VI KHUẨN Agrobacterium tumefaciens MANG VECTOR TÁI TỔ HỢP pGreen3-PR1

Abstract

Verticillium fungus is known for premature wilting and aging in many crops, significantly affecting crop yield. Currently, there is no specific method to control this type of fungus and only uses conventional chemical treatments. Using molecular biology techniques to inhibit the invasion of the fungus into the host is being interesting study. The PR1 gene is known to be related to the early stages of the fungus's invasion process into the host. To study the function of the PR1 gene in V. dahliae fungus, we created a strain of Agrobacterium tumefaciens (A. tumefaciens) carrying the recombinant vector pGreen3-PR1. In this study, we used SnapGene Viewer software and genetic modification techniques to create the recombinant vector pGreen3-PR1, in which the PR1 gene was fused with the GFP gene through a 15-nucleotide encoding sequence for a linker protein. SnapGene Viewer software was used to create the model of the recombinant vector pGreen3-PR1. The sequence of the PR1 gene and its promoter was amplified by PCR using specific primer pairs. The PCR product of 1.9 kb was ligated into the pGreen3 vector to create the recombinant vector pGreen3-PR1. The recombinant vector was confirmed by restriction enzyme digestion with EcoRV and sequence analysis using PR1-P1 and GFP-R primers. The result of the DNA sequence inserted into the recombinant vector shows 100% similarity with the sequence that was inserted into the vector designed using SnapGene Viewer software. The recombinant vector was then successfully transformed into A. tumefaciens bacteria using a heat shock method. The A. tumefaciens strain carrying the pGreen3-PR1 recombinant vector is now ready for further research on the position and function of the PR1 gene in Verticillium fungus.

Tóm tắt

Nấm Verticillium được biết là nguyên nhân gây bệnh héo và già sớm ở nhiều loại cây trồng, gây ảnh hưởng lớn đến năng suất cây trồng. Hiện nay, vẫn chưa có phương pháp đặc trị loại nấm này mà chỉ sử dụng hóa chất trị nấm thông thường. Sử dụng phương pháp sinh học phân tử nhằm ức chế sự xâm nhiễm của nấm vào ký chủ đang được quan tâm nghiên cứu. Gene PR1 được biết là có liên quan đến giai đoạn đầu quá trình xâm nhiễm của nấm vào ký chủ. Để nghiên cứu chức năng gene PR1 ở nấm Verticillium, đã tiến hành tạo chủng vi khuẩn Agrobacterium tumefaciens (A. tumefaciens) mang vector tái tổ hợp pGreen3-PR1. Nghiên cứu này sử dụng phần mềm SnapGen Viewer và các kỹ thuật cải biến di truyền để tạo vector tái tổ hợp pGreen3-PR1, trong đó gene PR1 được gắn với gene GFP thông qua 15 nucleotide mã hóa cho một đoạn protein liên kết. Sử dụng phần mềm SnapGen Viewer đã tạo được mô hình vector tái tổ hợp pGreen3-PR1. Trình tự gene PR1 và promoter đã được nhân lên bằng phản ứng PCR với các cặp mồi đặc hiệu. Sản phẩm PCR tạo ra băng 1,9 kb được gắn vào vector pGreen3 để tạo vector tái tổ hợp pGreen3-PR1. Vector tái tổ hợp tạo ra được cắt kiểm tra với enzyme giới hạn EcoRV và giải trình tự bằng hai mồi PR1‑P1 và GFP-R. Kết quả kiểm tra trình tự đoạn ADN gắn vào vector tái tổ hợp có sự tương đồng 100% với trình tự đoạn ADN đã chèn vào vector được thiết kế bằng phần mềm SnapGen Viewer. Sau đó, vector đã được chuyển thành công vào vi khuẩn A. tumefacien theo phương pháp sốc nhiệt. Chủng vi khuẩn A. tumefacien tạo ra mang vector tái tổ hợp pGreen3-PR1 sẵn sàng cho nghiên cứu về vị trí, chức năng của gene PR1 trên nấm Verticillium.