PHÂN LẬP VÀ TUYỂN CHỌN VI KHUẨN Bacillus sp. CÓ KHẢ NĂNG TỔNG HỢP PROTEASE TỪ SẢN PHẨM ĐẬU NÀNH LÊN MEN

Abstract

This study was carried out to isolated and selected Bacillus subtilis, which has synthesis highly special activity protease in submerged fermentation. The ability of protease production of these strains was investigated by measuring hydrolysis diameter on Skim milk agar (SMA) and submerged fermentation (SmF). From the fermented soybean products were collected in Can Tho city and some provines such as Dong Thap, Soc Trang and Hau Giang, 48 bacteria strains were isolated, the results of preliminary identification based on morphological (Cell and colony) and biochemical (Gram staining, spore production, catalase production and methyl red test) characteristics. The result showed all bacteria strains belong to genus Bacillus. Both of the strains resolved SMA, 5 baterial strains created halo larger than the others. TV3 was the best synthesis protease strain in submerged fermentation at 48 hours, 37^oC and pH 7.2 with protease activity reached 48.73 U/mL and specific activity reached 178.44 U/mg. TV3 was identification by Sanger sequencing of the 16S rRNA region and compared with database of BLAST software. The result detemined TV3 belong to Bacillus subtilis had similarity 99.93% with 16S rRNA sequence of Bacillus subtilis (NR027552.1). 

Tóm tắt

Nghiên cứu này được thực hiện với mục đích phân lập và tuyển chọn được dòng vi khuẩn Bacillus subtilis có khả năng tổng hợp protease có hoạt tính đặc hiệu cao từ sản phẩm đậu nành lên men. Sử dụng phương pháp đo đường kính vòng thủy phân (halo) trên môi trường Skim milk agar (SMA) và lên men trong môi trường lỏng để đánh giá khả năng sinh protease. Từ các sản phẩm đậu nành lên men được thu tại các địa điểm khác nhau tại thành phố Cần Thơ và các tỉnh Đồng Tháp, Sóc Trăng, Hậu Giang, phân lập được 48 dòng vi khuẩn, kết quả định danh sơ bộ dựa vào đặc điểm hình thái (tế bào và khuẩn lạc) và sinh hóa (nhuộm gram, khả năng sinh bào tử, khả năng sinh catalase và kiểm tra methyl red) cho thấy các dòng này thuộc giống Bacillus. Tất cả các dòng vi khuẩn đều có khả năng phân giải trên môi trường SMA, trong đó có 5 dòng tạo thành vòng halo lớn hơn các dòng còn lại. Dòng vi khuẩn TV3 được xác định là dòng vi khuẩn có khả năng sinh protease cao nhất ở môi trường lên men trong 48 giờ, nhiệt độ 37^oC và pH 7,2 với hoạt tính protease được xác định là 48,73 U/mL và hoạt tính đặc hiệu đạt 178,44 U/mg. Định danh dòng vi khuẩn TV3 bằng phương pháp giải trình tự vùng 16S rRNA theo phương pháp Sanger và so sánh với cơ sở dữ liệu của phần mềm BLAST, kết quả xác định dòng TV3 thuộc loài Bacillus subtilis có độ tương đồng 99,93% với trình tự 16S rRNA của Bacillus subtilis (NR027552.1).